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蛋白质鉴定试剂双缩脲的特点及其与Fehling's溶液的不同  

2013-10-31 15:20:12|  分类: 教育 |  标签: |举报 |字号 订阅

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蛋白质鉴定试剂双缩脲的特点及其与Fehling's溶液的不同

日期:2012-05-31 来源:未知 作者:keeii 点击:267
摘要:

双缩脲试剂主要用于蛋白鉴定的试剂。其组成成分虽与菲林试剂相同,但两者的方法和原理却是大有不同。本文主要是介绍蛋白鉴定的常用试剂双缩脲的基本情况,以及其与菲林试剂的区别。 双缩脲试剂(biuret reagent)是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液; 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g

双缩脲试剂主要用于蛋白鉴定的试剂。其组成成分虽与菲林试剂相同,但两者的方法和原理却是大有不同。本文主要是介绍蛋白鉴定的常用试剂双缩脲的基本情况,以及其与菲林试剂的区别。

双缩脲试剂(biuret reagent)是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成.

双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;

双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。

具体方法是:

先将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,振荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。

双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质,与蛋白质接触后的颜色呈紫色。

在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的.)

必须即配即用,以免生成氢氧化铜沉淀。

斐林试剂和双缩脲试剂的三点不同

(1)溶液浓度不同

斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同:

斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g/mlCuSO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.050.1g/ml;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01 g/mL。

(2)使用原理不同

斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

(3)使用方法不同

斐林试剂使用时,先反NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将4到5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中),而后立即使用:双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入3~4滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。

由此看出,专门用于蛋白鉴定试剂的双缩脲试剂虽然组成与用于还原糖鉴定的菲林试剂相同,但由于溶液浓度、使用原理、使用方法的不同,两者之间存在不小的差距,大家要使用的时候一定要看清楚哦。

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